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免疫印跡
檢測(cè)復(fù)雜樣品中某種蛋白的方法
免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質(zhì)印跡（Western blotting），是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。結(jié)合化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，可以同時(shí)比較多個(gè)樣品同種蛋白的表達(dá)量差異。原理如圖
基本信息
| 中文名 | 免疫印跡 |
| 基本步驟 | 抗原分離、抗原印跡和抗原檢定 |
| 別名 | 蛋白質(zhì)印跡 |
| 外文名 | immunoblotting |
基本介紹
可以同時(shí)比較多個(gè)樣品同種蛋白的表達(dá)量差異。
基本原理
將混合抗原樣品在凝膠板上進(jìn)行單向或雙向電泳分離, 然后取固定化基質(zhì)膜與凝膠相貼。在印跡紙的自然吸附力、電場(chǎng)力或其它外力作用下, 使凝膠中的單一抗原組份轉(zhuǎn)移到印跡紙上, 并且固相化。最后應(yīng)用免疫復(fù)蓋液技術(shù)如免疫同位素探針或免疫酶探針等, 對(duì)抗原固定化基質(zhì)膜進(jìn)行檢測(cè)和分析。
優(yōu)點(diǎn)
免疫印跡法是一項(xiàng)分析抗原、抗體的技術(shù)。它具有下列優(yōu)點(diǎn)：
1、濕的固定化基質(zhì)膜柔韌, 易于操作；
2 、固定化的生物大分子可均一的與各種免疫探針接近, 不會(huì)象凝膠那樣受孔徑阻隔；
3、免疫印跡分析只需少量試劑；
4、孵育、洗滌的時(shí)間明顯減短；
5、可同時(shí)制作多個(gè)拷貝, 用于多種分析和鑒定；
6、結(jié)果以圖譜形式可長(zhǎng)期保存；
7、免疫探針可通過(guò)降低PH值等方法, 象抹去錄音磁帶一樣將探針抹掉, 再換用第二探針進(jìn)行分析檢測(cè)。免疫印跡法的應(yīng)用范圍及優(yōu)點(diǎn)不僅局限于此, 它必將隨著這一方法的深入研究而不斷發(fā)展和完善。
相關(guān)領(lǐng)域
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